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          10x单细胞免疫组库TCR/BCR测序

           

           

          10x单细胞免疫组库TCR/BCR测序

           

          目前Chromium?单细胞V(D)J解决方案已升级,升级后的解决方案(Chromium Single Cell 5'Solution)一个样本可同时获得单细胞基因5'表达谱、T细胞受体和B细胞免疫球蛋白库的信息.可以结合基因的表达谱和V(D)J数据进行复杂组织样本的适应性免疫应答分析监测免疫疗法的效果,研究复杂的自身免疫性疾病、传染性疾病和其它免疫疾病。

           

          V(D)J重组产生TCR/BCR多样性

           

           

           
           
          技术优势
           
          (1)可以拼接获得V(D)J区域全长信息;
          (2)没有V-和J-特异性引物,避免了复杂的多重PCR的偏好性问题;
          (3)在获得每个细胞V(D)J信息的同时,可以同时获得T细胞和B细胞的转录谱信息。
           
           

           

           

          实验流程

           

           

          Chromium Single Cell 5' Solution实验流程

           

          Chromium Single Cell 5' Solution和Chromium Single Cell 3' Solution的主要区别在于凝胶珠上的引物序列有所不同
          这种不同,使得Chromium Single Cell 3' Solution可以捕获mRNA的3' 端进行转录组测序
          Chromium Single Cell 5' Solution可以捕获mRNA的5'端进行转录组测序并进行T细胞和B细胞的免疫组库测序
          详细的5' cDNA建库及TCR/BCR V(D)J片段特异性扩增细节如下图所示

           

          5' cDNA建库及TCR/BCR片段特异性扩增细节示意图
           
          如上图所示,将cDNA一份为二(如果同时做TCR和BCR的话则为三),分别构建5基因表达文库和TCR(BCR)V(D)J文库。
           
          5'单细胞表达谱和V(D)J免疫组库实验流程

           

          上图是Chromium Single Cell 5' Solution的整体工作流程。加入样本产生单细胞油包水结构,反转录成cDNA后,选择不同的研究目的进行文库构建:5'基因表达文库、TCR的V(D)J文库或和BCR的V(D)J文库。

            

           

           

          5单细胞表达谱和V(D)J免疫组文库比较

           

          5单细胞表达谱和V(D)J免疫组测序参数比较

           

           

            

          样本要求

           

          (1)样品总量:制备成细胞悬浮液,一个样本的细胞起始量需大于1x10 5个;
          (2)样品浓度:最终上样前细胞浓度在700 - 1,200 cells / μL;
          (3)细胞活性:活细胞数目在85 %以上;
          (4)细胞大?。?/strong>直径小于40 μm;
          (5)细胞培养基及缓冲液不能含有Ca 2+和Mg 2+等影响酶活性的物质;
          (6)组织需解离成单细胞悬液
          (7)提供细胞悬液中目标细胞(T细胞或B细胞)的数目比例 

            

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